I oktober 1524, to år efter at være blevet drevet ud af Italien, førte
Francis I
en ny stor fransk hær over Alperne. Han generobrede Milano fra den
habsburgske hær under den tysk-romerske kejser Karl
V samme måned. Franskmændene marcherede 32 km mod syd
og lagde Pavia under belejring. For at undsætte byen førte
Fernando
de Avalos (Marquis de Pescara) og overløberen hertug Charles
de Bourbon (tidligere fransk constable) en kejserlig hær frem
af lignende styrke (omkring 20.000 mand), primært spaniere.
Den 21. februar 1525 angreb denne styrke de franske
belejringslinjer, kun for at blive slået tilbage af kraftig artilleriild.
Francis indledte et modangreb med kavaleri for at følge op på
sit overtag, men det spanske infanteri holdt stand. Slaget nåede
et afgørende punkt da Pescara indsatte et korps på 1.500 erfarne
hagebøsse-skytter på flanken af de franske linjer. Herfra
gennemhullede koncentreret musketild de franske rækker og deres
allierede schweiziske infanteri. Da spanierne angreb igen, ryddede de slagmarken.
Francis selv blev taget til fange og sendt til Madrid. Her indgik han
fred året efter, hvori han afstod de franske krav på Italien.
Således blev Pavia det afgørende slag under de italienske
krige i den første halvdel af det 16. århundrede.